石蜡切片作用

石蜡切片的原理和基本步骤？

石蜡切片的原理和基本步骤？

1.修复：

将新鲜组织切成小片，并在4%多聚甲醛中固定过夜。将组织中的物质成分固化，尽可能保持其在体内的结构。同时可以使组织变硬，有利于切片。

2.脱水：

为了减少组织材料的急剧收缩，每次要从低浓度到高浓度通过70%、85%、95%直至纯酒精(无水乙醇)1小时。染色组织材料需要去除组织中残留的固定液及其晶体沉淀，否则会影响后期的染色效果。

3.透明度：

常用的透明剂是二甲苯，是石蜡的溶剂。纯酒精不溶于石蜡，所以需要用溶于酒精和石蜡的溶剂来代替组织中的酒精。在透明剂的浸渍过程中，材料块被认为是透明的。

4.浸蜡：

首先，将一块组织材料浸入熔融石蜡和二甲苯的等量混合物中1小时。连续移入两种融化的石蜡溶液中浸泡约1小时。

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盒底用少许热蜡液快速贴在包埋盒上，然后放在速冻台上固定石蜡。

切片：

切片刀的锋利程度和蜡块的硬度直接影响切片的质量。蜡块的硬度可以通过放入冷水中来改变。通常切片厚度为3-5um，用刷子轻托，放入37度水浴中使切片显影。

7.修理和烘烤：

一般使用恒温水浴锅，温度控制在37-40左右，有利于石蜡切片的开展。贴好的切片在60的恒温箱中干燥2小时，待蛋白凝固后即可染色。

8.切片脱蜡和水合：

将干燥的切片在二甲苯中脱蜡，然后用纯乙醇(按降序为95%、85%和70%)水合。

9.染色：

经典苏木精和曙红：的细胞核被苏木精染成紫蓝色，大部分细胞质和非细胞成分被曙红染成粉红色。实验操作简单。

免疫组织化学：是指在组织细胞内，通过抗原抗体反应和组织化学显色反应，原位用显色剂标记的特异性抗体。