牛油果日斑类病毒
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检疫方法
寄主的鉴定:将待测材料嫁接到牛油果品种的幼苗上。2个月至3年后,嫁接苗的茎在子叶上出现黄色、橙色或白色的条纹或斑点,有时叶子出现斑驳和扭曲的症状。胚胎移植或高温培养会加速症状的形成。你也可以用浸泡在部分净化的病汁中的刀来切茎。生物鉴定法被广泛应用并成功用于选择无毒繁殖材料,但这种方法的缺点是耗时长。聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定:ASBVd可从感染鳄梨树的叶片、叶柄、花芽组织和茎中纯化得到,类病毒存在于叶绿体组分中,不存在于细胞质和线粒体组分中。纯化方法与其他类病毒相似。首先,将磨碎的植物组织与提取缓冲液一起温育,然后用酚氯仿提取以释放核酸。然后,用甲氧基乙醇提取除去植物组织中的多糖,用乙醇沉淀上清液。经CF-11纤维素柱纯化后,获得类病毒核酸的粗提物。粗提物经聚丙烯酰胺凝胶双向电泳后,从植物组织的RNA中分离出环状病毒样RNA条带,环状RNA具有感染性。切下特定的病毒样条带,洗脱凝胶,获得高纯度的病毒样核酸。将纯化后的核酸通过机械接种在牛油果品种的幼苗上,观察症状,进一步确认类病毒的存在。
核酸杂交:由于识别宿主的症状形成较慢,以标记的互补DNA为探针的核酸杂交可轻松识别ASBVd,其灵敏度比PAGE法高1000倍。
RT-PCR:根据已报道的序列合成特异性PCR引物进行逆转录PCR检测,灵敏度高,快速简便,可同时处理多个样品,但容易产生假阳性。
检疫措施:
禁止从疫区进口鳄梨及相关繁殖材料。防治方法:
使用无毒繁殖材料:通过种子传播种植健康繁殖材料是一种有效的防治措施。但ASBVd在很多牛油果品种中并不表现症状,所以要用上述方法检测育种材料。污染器械的消毒:常见于无病、有毒的田间植物,容易通过污染的刀具传播到健康的植物上。因此,彻底消毒被污染的菜园中的农具对防治这种疾病是非常重要的。5%家用漂白粉(次氯酸钠),2%甲醛和2% NaOH的1: 1混合物,或6%过氧化氢可有效灭活被污染器械上的ASBVD(Desjardin et al .1987)。
使用无症状的抗病品种:认为抗病品种感染ASBVd后产量损失较小,可用于疫区控制病害。但无症状品种可作为ASBVd的一级传染源,对该病的控制可能会进一步复杂化,因此有必要深入研究这种方法的可行性。
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