论文解读：VetWorld，引起杂交石斑鱼暴发病毒性神经坏死的鱼类神经坏死病毒与重组RGNNV/SJNNV病毒株高度相似。

病毒性神经坏死(VNN)是一种严重的海洋鱼类疾病。VNN在幼虫期造成100%的死亡率，而幼鱼和成鱼的死亡率较低。本研究的目的是确定马来西亚杂交石斑鱼孵化场的相关危险因素和致病因子基因型，并检测VNN的发生。

于2016年9月30日至2017年3月29日在马来西亚西部的一个杂交石斑鱼(褐点石斑鱼龙胆石斑鱼)孵化场进行横断面采样，以检测在正常的杂交石斑鱼苗种生产过程中是否存在VNN。孵化场每年生产两到三批鱼。在每个采样期间，评估与NNV感染和VNN病相关的风险因素，如鱼龄、水系、人工饲料、活饲料、寿命(从鱼苗到成体)和水质参数。在取样期间，观察并记录所有与VNN相关的临床症状。在整个研究期间，220尾杂交石斑鱼鱼苗(3000尾仔鱼在第0天在鱼塘；17个鱼塘第10天仔鱼85尾；两个鱼塘第20天40尾仔鱼；第30、40、60和90天的20只幼虫；和第180天的14只幼虫)进行取样并相应地收集(表1)。

为了证实由VNN引起的病毒的水平传播，每天从饲养杂交石斑鱼的池塘和水池中收集500毫升水样，一式两份。为了评估与VNN相关的风险因素，在采样期间，在混合石斑鱼饲养池和槽中约1米深度处测量了水质参数。测量的水质参数包括温度、溶解氧含量、pH值、盐度、氨氮、硝酸盐和亚硝酸盐浓度，所有这些都是使用手持式YSI仪器在现场测量的。记录的数据用于确定VNN或其相关病毒的发生与不同生命阶段的杂交石斑鱼孵化场水质之间的可能相关性。在第10天和第60天采集包括桡足类和轮虫在内的500mL活饲料样品，并在第60天、第90天和第180天采集人工饲料样品，以确定VNN病毒在杂交石斑鱼中可能的水平传播。取样期间收集的所有样品在进一步分析前都储存在-20C下。

逆转录RT-PCR和巢式PCR用于扩增VNN相关序列(表2)。MEGA方法用于从所有已知贝塔诺达病毒种的外壳蛋白基因推断包含VNN致病因子的系统发育树。计算皮尔逊相关系数以确定杂交石斑鱼样本中VNN的存在与其相关风险因素之间的相关强度。

主要结果如下：

孵化场管理

在整个研究期间，孵化场没有进行适当的饲养操作、良好的卫生或检疫(表3)。设施不同部分之间的生物安全维护也受到忽视。孵化场直接将水从附近的河口泵入培养容器，没有臭氧氧化系统或适当的过滤器来过滤进出的水。在海水(温度=32.3，盐度=25.71ppt)的圆形产卵池中培养第0天获得的初孵仔鱼。然后，在第二天，将幼虫转移到装有绿水(温度=32.3，盐度=25.71ppt)的土池中，并保持至第25天。在此期间，根据轮虫的数量，每天6-8次用室内生产的轮虫和桡足类喂养幼体。为了防止幼虫受到阳光直射，土池被黑色遮光网覆盖和包围。当幼体达到26日龄时，将它们转移到6个圆形PVC槽(水温=32，盐度=26ppt)中并在其中进行分割，然后饲养至180日龄(生长/成虫期)。第28天，仔鱼投喂人工饲料，不投喂杂鱼。

水质参数

从第0天到第180天，通过每日取样测量的水质参数显示出在孵化场设定的正常范围内的值(表4)。从第30天到第60天，水温低于研究期间的其他时间(29)。同样，在第30天至第40天(18-19ppt)，观察到海水的盐度较低。30 ~ 180天后的溶解氧(5.52 ~ 5.74 mg/L)显著高于0 ~ 20天后的溶解氧(4.42 ~ 4.52 mg/L)。pH值在180天达到最低，30天达到最高，但不低于7。

VNN检测

在包括杂交石斑鱼、水和人工饲料样本在内的146份集体样本和个体样本中，共有113份样本在VNN相关病毒检测中呈阳性结果。感染的临床症状包括皮肤变黑、脊柱变形、腹胀、皮肤损伤和鳍糜烂。VNN存在于杂交石斑鱼的整个生命阶段，第一次检测发生在第10天(表5)。

VNN相关风险因素分析

与VNN相关的风险因素包括水温、溶解氧含量、盐度、氨含量、鱼的大小(成鱼比幼鱼更危险)和寿命(年龄)(表6)。在水样中检测到VNN病毒证明了该疾病的水平传播。

本研究中发现的所有核苷酸序列彼此具有88%至100%的高度核苷酸同源性，即NNV/SJNNV(RGNNNV/SJNNV)430.2004(GenBank登录号JN189932.1)(n=26)。系统发育分析显示，在每个VNN病毒阳性样本中都有相似的物种，这随样本类型和生命周期而变化(图2)。

本研究首次证实了马来西亚和南洋杂交石斑鱼神经坏死病毒(RGNNV/SJNNV)重组株的存在。然而，这种病毒的传播方式和危险因素之间的关系需要进一步研究，以了解重组毒株和潜在新宿主物种的进化。