斜带石斑鱼病原的分离鉴定及药敏分析
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采集具有典型腐烂症状的斜带石斑鱼、健康的斜带石斑鱼、未感染的池塘水和常用的商品化治疗药物进行病原分离、鉴定和药敏分析,为病原判定和治疗提供理论依据和实践指导。
斜带石斑鱼是福建沿海养殖的主要经济鱼类之一。近年来,由于养殖户对经济效益的过度追求,随着养殖规模的扩大,暴发性死亡时有发生。近年来,每到5-10月的高温季节,斜带石斑鱼从幼鱼到成鱼阶段都会发生“腐体病”,尤其是幼鱼阶段,会造成大量死亡,给福建沿海的斜带石斑鱼养殖业带来巨大的经济损失。
发现斜带石斑鱼,左侧皮肤轻度溃烂,右侧肌肉重度溃烂。
2015年9月,福建漳浦县神土镇一家石斑鱼养殖场爆发“烂病”。病鱼大小约7cm,腐烂程度不一。轻鱼的鳞片从表皮到真皮脱落,重鱼的肌肉溃烂露出脊椎。感染严重的斜带石斑鱼出现游动缓慢、体表发黑、抵抗力低下等症状,死亡率高达80%。为了确定"烂体病"的病因和治疗方案,从该石斑鱼养殖场采集了具有典型烂体症状的斜带石斑鱼、健康斜带石斑鱼、未感染的池塘水和常用的市售治疗药物进行病原分离、鉴定和药敏分析,为该病的病原鉴定和治疗提供了理论依据和实践指导。
一.病原体的分离和纯化
用70%酒精棉球对患病的斜带石斑鱼非溃烂部位进行消毒。用火焰燃烧接种环从溃疡处挑出少量组织,涂在用海水配制的BHI固体培养基上,37培养18小时。根据培养结果,选择并记录优势单菌落。相同条件培养后,用革兰氏染色判断是否有杂菌污染。结果表明,优势菌呈红色,杆状,有一定的曲率。纯化后的单菌落在含2%NaCl的BHI液体培养基中于37、200r/min培养18小时后用于后续实验。
革兰氏染色后,分离的病原菌呈红色,杆状,有一定弧度。
二、病原菌的鉴定
将获得的病原菌通过口服、腹腔注射、伤口浸泡等方式人工感染健康的斜带石斑鱼,收集未感染的池水暂养于诏安神爽动物保护技术服务中心循环水系统。一周内发现,三种感染方式均可使斜带石斑鱼患上“烂皮病”,伤口浸泡形成的烂皮数量最多,其次是腹腔注射,最后是口服注射。用16srDNA通用引物:27F(5 '-agagtttgatcctgtgctcag-3 ')和1492 r(5 '-ggttacctttgttaggactt-3 ')对所选病原菌进行分子生物学鉴定,所得序列用BLAST工具与Vibrioharveyi进行比较,相似度为99%。
三、药敏试验
1.四种常用消毒剂的比较试验
采用牛津杯法选择福尔马林(有效成分:37%-40%甲醛)、金碘(有效成分:聚维酮碘)、六安(有效成分:均三氯甲苯)、韦杰(有效成分:戊二醛、苯扎溴铵)四种常用消毒剂进行药敏试验。吸取100 l培养好的致病菌液,均匀涂于用海水配制的BHI固体培养基上,然后将100L用双蒸水稀释的不同消毒剂(2% w/v)倒入牛津杯中,做6次平行培养,37放置18h后观察抑菌效果。实验结果表明,病原菌对福尔马林最敏感,抑菌圈直径约为30mm,其次是金碘,约为17mm,韦杰约为15 mm,6组实验表明六安对病原菌不敏感,未发现明显抑菌圈。
2.五种抗生素的对比试验。
选用强力泰(有效成分:恩诺沙星)、胡乐芬(有效成分:氟苯尼考)、日本黄粉(有效成分:呋喃苯甲酸钠)、雨雪安(有效成分:盐酸环丙沙星、盐酸小檗碱)、呋喃西林五种抗生素,并采用牛津杯进行药敏试验。称取每种抗生素0.2g,溶于50mL生理盐水中,制成4g/L溶液。吸取100L培养好的病原体溶液,均匀涂于用海水配制的BHI固体培养基上,然后吸取100L相应的抗生素溶液于牛津杯中,连续做6次平行操作。在37培养18小时后观察到抑菌效果。结果表明,5种抗生素对病原菌均有抑制作用。病原菌对日本黄粉最敏感,抑菌圈直径约为35mm,其次为胡乐芬,抑菌圈直径约为27 mm,玉雪安和强力泰抑菌效果相近,抑菌圈直径分别约为22mm和20mm。呋喃西林抑菌效果不稳定,抑菌圈直径约为18 mm。
四。预防和控制建议
根据实验结果,证明哈氏弧菌是引起斜带石斑鱼腐烂体和大量死亡的主要病原。因此,有必要通过药敏试验筛选出合适的内服药物和水消毒剂,以防治斜带石斑鱼的"烂体病",从而减少斜带石斑鱼养殖户的经济损失。
通过对市场上常见的四种消毒剂福尔马林、金碘、六安、韦杰的药敏试验,发现福尔马林的抑菌作用最强,其次是金碘。但由于福尔马林对人体和石斑鱼有一定的毒副作用,其安全性与黄金、碘略有不同。所以综合考虑,碘金(有效成分:聚维酮碘)是最适合外渗的消毒剂。
对比五种抗生素的药敏试验结果,发现致病菌对日本黄粉最敏感,但属于硝基呋喃类,对人体有潜在致突变性和致癌性,不推荐使用。胡乐芬、鱼血安、强力泰三种抗生素安全性高,可作为内服药物用于防治石斑鱼的“腐体病”。根据抗菌效果,推荐首选胡乐芬(有效成分:氟苯尼考)。
笔者根据实地调查发现,部分石斑鱼养殖户追求经济利润过高,养殖密度不变。
提高,在高温季节时一旦养殖水体出现恶化,引起“烂身病”的哈维氏菌将持续增殖,最终导致养殖的石斑鱼大量死亡。因此通过搭设遮阳网控制好养殖池中水体温度和调整养殖密度,能够有效的预防石斑鱼“烂身病”的发生。对于已经发病的养殖池不要盲目的使用市面上的药品,只有科学合理的使用水产药物才能在实际养殖生产中更好的防治石斑鱼“烂身病”,引导水产养殖业健康持续发展。本文主要介绍了关于斜带石斑鱼病原的分离鉴定及药敏分析的相关养殖或种植技术,养殖技术栏目还介绍了该行业生产经营方式及经营管理,关注养殖技术发展动向,注重系统性、科学性、实用性和先进性,内容全面新颖、重点突出、通俗易懂,全面给您讲解养殖技术技术怎么管理的要点,是您养殖技术致富的点金石。
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