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河北农业大学海洋学院

水产动物饲料原料中，饲料蛋白源最为稀缺，积极开发饲料蛋白源具有较高的经济效益和社会效益。目前，鱼类蛋白源的研究、开发和利用主要集中在动物、植物和单细胞蛋白源上。

饲料酵母是单细胞蛋白，是以酒精废液、味精废液、亚硫酸盐浆废液、石蜡油或糖蜜为原料，以热带假丝酵母和产朊假丝酵母为菌种，在发酵罐中培养繁殖得到的细胞浓缩物。蛋白质含45%~60%的氨基酸，并富含B族维生素、酶类及多种活性物质，如辅酶a、辅酶Q、细胞色素C、凝血素、谷胱甘肽、卵磷脂、麦角固醇、核糖核酸等。实验所用的饲料酵母是以淀粉企业生产淀粉和葡萄糖的副产物为底物，以产朊假丝酵母为菌种，经过发酵、蒸发、喷雾干燥等一系列工艺制成的。该饲料酵母含蛋白质46%，粗脂肪3%，核酸8%，赖氨酸较高，蛋氨酸较少，营养丰富。如果能充分利用饲料酵母作为蛋白质来源，最大限度地替代鱼粉，不仅可以减少鱼粉的使用，降低生产成本；还可以充分利用我国玉米深加工的副产品资源，解决资源再利用问题。饲料酵母对鱼类的影响已在多种鱼类中进行了研究，研究内容多集中在饲料酵母替代鱼粉后对鱼类生长和饲料利用的研究。研究对象多为鲤鱼、建鲤、罗非鱼和淡水鲳鱼，对大菱鲆的研究很少。大菱鲆(Scophthalmus maximus)在中国俗称多宝鱼，是一种底栖肉食性鱼类，容易驯服，生长速度快，肉质鲜嫩，味道独特。大菱鲆对蛋白质营养的需求很高。蛋白质含量低于39%时，幼鱼生长缓慢，只有蛋白质含量高于42%时，大菱鲆幼鱼才会快速生长。

因此，研究生物饲料酵母在大菱鲆饲料中的应用具有典型性。为给生物饲料酵母的应用提供参考，采用营养学和免疫学方法研究了生物饲料酵母替代鱼粉的可行性及其在大菱鲆饲料中的适宜添加比例。

1材料和方法

1.1试验饲料的准备

实验所用鱼粉为秘鲁鱼粉，粗蛋白为68%，生物饲料酵母由秦皇岛利华淀粉有限公司生产，粗蛋白含量为48.3%。根据不同的替代率设计了五种不同的饲料配方。组为不添加饲料酵母的对照组，、、、组分别含15%、30%、45%、60%。饲料配方和常规饲料成分见表1。按照饲料配方，将所有饲料原料用粉碎机粉碎，过80目筛混合均匀，用F-26双螺杆挤出机制成1.5mm硬颗粒饲料，70烘干，装袋密封，放入-20冰箱保存备用。

注：其他含磷虾粉2%；5%玉米淀粉；复合矿物盐0.5%；2%多种维生素；胆碱0.5%；维生素C磷酸酯0.4%；1%的羧甲基纤维素钠；三氧化二钇0.01%。复合矿物盐：氯化钴0.04、硫酸铜2.5、硫酸亚铁40、硫酸镁283.98、硫酸锰6.5、碘化钾0.67、亚硒酸钠0.1、硫酸锌131.93、填料534.28g/kg。复合维生素：盐酸硫胺素0.5、核黄素3、维生素B61、烟酸5、肌醇5、泛酸钙5、生物素0.05、叶酸0.18、维生素K32、维生素B120.002、维生素A醋酸酯(20000 IU/g)5；维生素D3 (40万IU/g)0.002，维生素E(250IU/g)8，纤维素865.266g/kg。

1.2实验设计和饲养管理

大菱鲆幼鱼购自秦皇岛天河水产良种有限公司，平均体重(9.020.15)g，平均体长(6.100.06)cm。采用单因素完全随机分组设计，将200尾大菱鲆幼鱼随机分为5组，每组3个重复，每个重复13尾。在室内循环水的水族箱(120L)中饲养，用试验饲料驯化10天，待鱼适应后开始实验。水温为(181), pH为(7.60.4)，溶解氧大于8mg/L，盐度为(30.60.02)。每天喂三次(上午07: 00，中午12: 00，下午18: 00)，喂量为体重的3%~4%nbs。

p;， 14 d 调整投喂量。试验期56 d。
1.3 样品采集与分析
试验结束后，禁食1 d 称质量，每箱随机取3尾鱼再次称质量后，于105 ℃ 烘干，用微型粉碎机粉碎，称质量，装入密封袋中于-20 ℃冰箱中冷冻保存，用于全鱼粗蛋白、粗灰分和粗脂肪含量的分析。另随机从每箱随机取3 尾鱼，麻醉处理后，测体长和体质量，然后用2.5 mL 一次性无菌注射器（含肝素钠）从心脏采血，置于4 ℃冰箱过夜，在3 000 r/min 4 ℃下离心10 min，分离血浆，收集的血浆保存于-80 ℃冰箱待测。
1.3.1 体成分的测定
饲料及鱼体成分均采用国标法进行测定：干物质采用105 ℃烘箱干燥法；灰分采用马弗炉灼烧法（550 ℃）；粗蛋白质采用凯氏定氮法; 粗脂肪采用索氏抽提法( 以石油醚为溶剂)。
1.3.2 生化指标的测定
血清中的总蛋白采用考马斯亮蓝染色法，超氧化物歧化酶（SOD）活力的测定采用黄嘌呤氧化酶法，碱性磷酸酶（AKP）测定采用磷酸苯二钠比色法，以上指标均用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒测定。
1.4 数据处理
试验结果用平均数± 标准误差表示， 采用SPSS 17.0 统计软件对数据进行统计学分析，先对数据作单因素方差分析(One-way ANOVA) ，若组间差异显著，再用Duncan’s 法进行多重比较，显著水平为 0.05。
2 结果
2.1 不同比例的生物饲料酵母替代鱼粉对大菱鲆生长性能的影响
从表2 可见：生物饲料酵母替代鱼粉的比例低于68 % 时，Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组和Ⅴ组的增重率（WGR）和对照组均无显著差异，但是Ⅱ组WGR显著高于Ⅳ组和Ⅴ组，但Ⅱ组和Ⅲ组间，Ⅳ组和Ⅴ组间并无明显差异。特定生长率（SGR）与WGR趋势一致。对照组的饲料系数（FCR）和蛋白质效率（PER）与Ⅱ组和Ⅲ组的组间差异不显著，与Ⅴ组差异显著。Ⅱ组和Ⅳ组的SR 均显著高于对照组，而Ⅴ组显著低于对照组12.1 %。结果表明：饲料中用饲料酵母替代鱼粉17 %~51 % 时，对大菱鲆的生长性能没有显著性的影响，但是51 % 替代（Ⅳ组）时，虽然SR 与17 % 替代组（Ⅱ组）相差不大，但WGR、SGR 和PER 显著低于17 % 替代组（Ⅱ组）。34 % 替代（Ⅲ组）时，虽然WGR、SGR、FCR 和PER 都和对照组差别不大，但其SR 却远远低于17 % 替代组（Ⅱ组）。
2.2 不同比例的生物饲料酵母替代鱼粉对大菱鲆形体指标的影响
从表3 可见：随着饲料酵母替代鱼粉比例的增加，肝体指数（HSI）和内脏指数（VSI）均逐渐下降，Ⅱ组与Ⅲ组的HSI 分别显著高于对照组45.4 % 和38.1 %，Ⅳ组与对照组无显著差异，而Ⅴ组的HSI显著低于对照组69.2 %。Ⅱ组的VSI 显著高于对照组24.6 %， Ⅲ组和Ⅳ组的VSI 与对照组差异不明显，而Ⅴ组显著低于对照组3.7 %。Ⅱ组和Ⅴ组的肥满度（CF）与对照组无显著差异，Ⅲ组和Ⅳ组分别显著高于对照组15.7 % 和13.4 %。
2.3 不同比例的生物饲料酵母替代鱼粉对大菱鲆体成分的影响
从表4 可见：全鱼水分含量随着替代比例的增加无显著差异，但Ⅱ组的水分含量最低；随着生物饲料酵母替代鱼粉比例的不断增加，粗蛋白含量产生了显著差异，Ⅲ组与对照组差异不显著，Ⅱ组显著高于对照组，Ⅳ组和Ⅴ组显著低于对照组。粗脂肪的含量Ⅳ组最高，Ⅲ组次之，Ⅱ组最低，但各组间差异不明显。Ⅳ组和Ⅴ组的灰分含量差异不明显，其他各组差异显著，Ⅰ组、Ⅲ组、Ⅳ组和Ⅴ组分别显著高于Ⅱ组29.1 %、45.6 %，57.53 % 和58.72 %。
2.4 不同比例的生物饲料酵母替代鱼粉对大菱鲆免疫机能的影响
从表5 可见：Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组的溶菌酶的活性与Ⅳ组和Ⅴ组差异显著，但Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组间，Ⅳ组和Ⅴ组间均无显著差异。随着替代比例的增加，杀菌活性差异不明显。AKP 活性出现先升高后降低的趋势，Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组无显著性差异，但Ⅲ组与Ⅳ组和Ⅴ组差异显著。SOD 呈现逐渐降低的趋势，血清中的蛋白含量Ⅱ组最高，其他组逐渐降低。
3 讨论
试验中，饲料中添加17 % 的生物饲料酵母时，大菱鲆的生长性能最佳，这与张梁网箱养殖淡水白鯧的结果相同。诸多研究表明：饲料酵母部分或全部替代鱼粉应用在水产动物上是可行的，但是要根据养殖种类和鱼类食性的差异，调整饲料配方，满足鱼类营养的需要。
生物饲料酵母替代鱼粉应用在大菱鲆的饲料中，结果表明：随生物饲料酵母替代鱼粉比例的增加，大菱鲆的WGR、SGR 和PER 随之下降，表明高比例的饲料酵母不利于大菱鲆的生长，可能是试验对象为幼鱼，需要较多的能量来满足鱼体的生长，当饲料酵母增多时，幼鱼难于消化，饲料中可消化能减少的缘故。但葛树立用活性酵母养殖罗非鱼时，随着替代比例的增加，WGR 增加，FCR 降低，表明活性酵母明显促进罗飞鱼的生长。这可能与养殖品种、酵母的来源和组成等有关。较高的饲料酵母替代鱼粉也同样降低了鲤鱼、淡水白鯧和胡子鲶的摄食和生长，也可能是高质量浓度的饲料酵母引起鱼体的免疫反应过度，导致用于生长的能量和营养素减少。Rumsey 等则认为：完整的酵母细胞无法使胞内的营养成分释放出来而被鱼类利用是高含量酵母能力较差的原因。
幼鱼的消化系统发育不及成鱼完善，对各种环境因子尤其是食物因子的变化反应比较敏感，当饲料中大量添加生物饲料酵母时，可能会对消化系统的发育产生一定的影响，HSI 和VSI 等会发生较大变化。在试验中，Ⅱ组和Ⅲ组的HIS、VSI 和CF均高于对照组，说明一定比例的饲料酵母会刺激鱼体形体的生长，改善肝功能，但黄钧用加酶饲料酵母替代鱼粉饲养丰鲤时，鱼粉组的CF 显著高于各饲料酵母替代组。
试验结果表明：随生物饲料酵母替代鱼粉比例的增加，水分和脂肪含量无明显变化，粗蛋白含量逐渐降低，而灰分的含量逐渐升高。而程光平用酵母蛋白替代鱼粉饲养胡子鲶，测定其水分、粗蛋白、粗灰分和氨基酸总量时，与鱼粉组均没有差异。当饲料酵母替代鱼粉超过51 % 时，粗蛋白的含量显著下降，表明高比例的生物饲料酵母替代鱼粉会影响蛋白质在鱼体内的沉积，这与高含量饲料酵母组的饲料利用率较低有关。从总体来看，Ⅱ组的粗蛋白含量最高，显著高于对照组，而其粗脂肪含量又最低，说明饲料中添加17 % 的生物饲料酵母能够增加鱼的蛋白含量，减少脂肪的堆积，能显著提高鱼肉的品质，使鱼肉更加鲜嫩可口。
溶菌酶广泛存在于动物体内的许多组织和体液中，是能否杀灭病原菌的物质基础，血清中的溶酶菌主要来自血细胞中，是一种碱性球蛋白，能够专一性地水解肽多糖分子中β-1，4 糖苷键，从而破坏并裂解细胞壁，最终使细菌死亡，实现其机体防御的功能。测定鱼体的溶菌酶活性，可以一定程度上反应鱼类非特异性体液免疫状态。试验中，溶菌酶的活性在添加17 % 生物饲料酵母时最高，增加饲料酵母的添加量，溶菌酶活性反而降低，说明高质量浓度的生物饲料酵母对溶菌酶的活性可能具有抑制作用。
SOD 具有催化超氧离子自由基进行歧化反应的功能，是机体清除氧自由基的重要抗氧化保护酶，它能促使自由基的形成和使清除处于动态平衡，从而清除自由基对机体的危害，保护细胞免受损伤。
当 SOD 活性降低时，其自由基等毒害物质就会积累。试验中，血清中的蛋白含量和SOD 也都随着饲料酵母添加比例的增加而减少，说明添加高比例的饲料酵母可以减弱机体的免疫能力，这可能也是导致高替代组病死率增加的重要原因之一。
综上所述，饲料酵母替代饲料中约17 % 的鱼粉可以使大菱鲆的生长、成活率、机体营养成分和免疫机能优于其他各组。
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