论文解读：Fishshellfisheries，病毒膜蛋白DNA疫苗对石斑鱼SGIV感染的保护性免疫。

新加坡石斑鱼虹彩病毒(SGIV)是中国南方主要的石斑鱼感染病毒。然而，没有有效的方法来控制这种病毒性疾病。本研究将编码病毒膜蛋白的SGIV-ORF19R(SGIV-19R)构建到pcDNA3.1-HA中，并评价其对石斑鱼的免疫保护效果。主要结果如下：

1.亚细胞定位显示SGIV-19R分布在EPC细胞质中。

2.共定位分析表明，该蛋白部分与内质网共定位。

EGFP标记的SGIV-19R信号与ER特异性RFP信号部分重叠，转染后24和48h细胞融合通道出现黄色荧光。然而，在细胞中没有观察到RFP标记的线粒体或高尔基体的这种重叠(数据未显示)，并且SGIV-19R蛋白在EPC细胞中部分共位于er中。

3.3的表达式。石斑鱼SGIV-19R基因疫苗。

RT-PCR和Westernblot分析证实，DNA疫苗pcDNA3.1-19R在接种石斑鱼的肌肉组织中表达SGIV-19R，SGIV-19R的高表达水平与较高的接种剂量有关。

4.免疫相关基因的转录水平

免疫石斑鱼脾脏、肝脏和肾脏中肿瘤坏死因子- (TNF-)、白细胞介素-1(IL-1)、MX-1和免疫球蛋白M(IgM)的转录水平显著升高。

5.5 .防护效果的评价。DNA疫苗

为了检验疫苗的保护效果，石斑鱼于15日龄腹腔注射SGIV，并在接种后21天内监测死亡率。如图5所示，首先在6dpi pcDNA3.1(C)组中记录到死亡，其次是8d ipcdna 3.1-19R(L)组，接着是10dpipcDNA3.1-19R(H)组。在45 g GPC DNA 3.1-19R的DNA剂量下，49.9%的鱼的相对存活率显著提高，而在90 g GPC DNA 3.1-19R的DNA剂量下，75.0%的鱼的相对存活率显著降低。这些数据表明，适当剂量的pcDNA3.1-19R可作为免疫石斑鱼抗SGIV感染的有效疫苗。

6.6的检测。SGIV病毒载量

用QPCR方法进一步检测死亡和存活石斑鱼脾脏中SGIV病毒载量。如表3所示，存活石斑鱼的病毒载量较低，为1.32101 ~ 1.21102拷贝/g病毒DNA，使用较多的DNA疫苗时病毒载量较少。相反，SGIV-19R表达组和载体表达组死亡石斑鱼脾脏组织中的病毒DNA含量均大于5.33 106拷贝/ g，死亡石斑鱼表现出SGIV感染和出血的典型症状，而存活石斑鱼未表现出这些症状。SGIV攻击后存活的石斑鱼脾脏病毒载量较低。

总之，我们的研究结果表明，编码SGIV-19R蛋白的DNA疫苗pcDNA3.1-19R能有效保护石斑鱼免受SGIV攻击。此外，pcDNA3.1-19R基因的表达可以增强石斑鱼的天然免疫反应和适应性免疫反应，这对对抗SGIV感染至关重要。这些结果表明pcDNA3.1-19R可能是控制SGIV疾病的候选疫苗。