摘要：

为了提高对虾养殖产量，有必要认真研究对虾养殖技术。在学习对虾养殖技术的过程中，逐渐积累了很多以前不知道的经验和方法，对提高对虾养殖产量有很大的帮助。

为了评价不同水平龙须菜粉对凡纳滨对虾生长性能、体指数、饲料利用率、体成分、血淋巴生化指标和肠道形态的影响，进行了为期8周的生长试验。设计了6种试验饲料，编号为GL1-GL6，分别含有0%、1%、2%、3%、4%和5%的龙须菜粉，饲喂初始体重为0.270.01克的凡纳滨对虾。试验结果表明，GL3组的平均终端体重(6.56克)和增重率(2，358.87%)最高，而GL1、GL2、GL5和GL6组显著低于GL3和GL4组蛋白质效率和产肉率的变化趋势与增重率一致，而饲料系数则相反。GL3和GL4组的饲料系数、血淋巴中天冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)活性显著降低，而全虾蛋白质沉积率和血淋巴中超氧化物歧化酶(SOD)活性显著提高(P0.05)。与对照组相比，当龙须菜粉添加量为2%时，凡纳滨对虾肠道微绒毛的长度和密度增加。因此，饲料中添加龙须菜粉可以改善凡纳滨对虾的生长、免疫和肠道健康。

1.前言

龙须菜属红藻门、巨藻门、江蓠属，是一种红藻海洋植物。近年来，海藻在饲料中的应用备受关注。以前的研究表明，作为蛋白质来源的大型或微型藻类可以添加到各种鱼饲料中，效果显著(Nandeesha等人，1998)。一些研究人员发现，由于藻类富含维生素、矿物质和生物活性化合物，可以促进脂质活化，提高鱼类的吸收效率(Mustafa et al .1995)。龙须菜作为世界上最有用的红藻之一(Kanjana et al .2011)，可以被人类食用或为鱼类和其他水生动物提供营养。此外，它还是药物成分的极好来源(Wen等，2006)，并且可以制备高质量的琼脂(Praiboon等，2006)。研究表明，从龙须菜中提取的活性代谢物或化合物具有抗病毒、抗真菌和抗菌活性(Bansemir等人，2006)。也有报道龙须菜中不饱和脂肪酸的主要成分是亚油酸和油酸，占总脂肪酸的61%，饱和脂肪酸的主要成分是棕榈酸，占总脂肪酸的39%(文等，2006)。大量研究表明，龙须菜主要由糖类组成，占藻类的40%以上，其中活性多糖约占70%，且富含矿物质和蛋白质，脂肪含量较低，一般在1%以下。龙须菜不仅蛋白质含量高于其他藻类，而且必需氨基酸比例也较高。此外，它还含有具有生理活性的牛磺酸，是蛋白质中营养价值很高的资源。近十年来，龙须菜产量大幅增加，已被我国东南沿海地区的企业广泛使用(杨等，2006)。综上所述，龙须菜产量高，价格低，膳食纤维高，热值低，具有一定的免疫活性，是一种很有潜力的水产饲料原料。

凡纳滨对虾是世界上最重要的海水养殖品种之一(FAO，2010)。随着消费量的增加，越来越多的研究开始关注该物种(张等，2014)。目前，鱼粉是凡纳滨对虾饲料中的主要蛋白质来源，但其高昂的价格限制了水产饲料的发展和应用。因此，开发利用龙须菜对降低凡纳滨对虾商品饲料的生产成本和提高饲料效率具有重要意义。

到目前为止，龙须菜主要用于提取琼脂和制作培养基，而在水产饲料中的应用研究较少。因此，本试验旨在通过在饲料中添加不同水平的龙须菜粉，评价其对凡纳滨对虾生长、饲料利用率、体成分和肠道健康的影响，为龙须菜粉在凡纳滨对虾饲料中的合理使用提供参考。

2.材料和方法

2.1实验进料

新鲜的龙须菜购自食品厂，用海水洗净，在80烘箱中烘干。饲料配方和常规营养成分分析见表1。设计了6种试验饲料，编号为GL1~GL6，分别含有0%、1%、2%、3%、4%和5%的龙须菜粉。为了提高饲料在水中的稳定性，应将饲料在90下蒸2小时，然后干燥至含水量10%左右，用塑料袋密封，保存在-20的冰箱中备用。

2.2实验管理

本试验在广东恒兴国家“863”计划海水养殖种子项目南方基地进行，虾苗在当地苗圃购买。实验前将它们放入室内循环水族箱(容积为1000升)中14天，使它们适应室内条件，在暂养期间用商品饲料喂养。实验中，海水用沙子过滤，前六周在静水中养殖，后两周在循环水中养殖。每个水族箱的流速约为3.0L/min，整个实验过程中持续使用低压鼓风机增加养殖水中的溶解氧含量。暂养结束后，开始正式试验，设置6个处理(1个对照组和5个试验组)，每个处理3个重复。选取相同规格的健康实验虾(平均体重0.270.01克)，随机分成18个容积为300升的水族箱，每箱放30只虾。每天投喂四次(07:00、12:00、17336000、21336000)，投喂量为体重的7%~8%，每天记录每个水族箱对虾的投喂量，根据前一天的投喂量和死亡对虾调整投喂量；同时将残留的饵料、粪便、蜕皮、死虾吸出箱外(虹吸法)。实验期为8周。整个实验期

采用自然光照，期间盐度25‰~27‰，水温为22~28℃，溶氧为≥5.5 mg/L，pH值为8.0~8.4，总氨氮含量为0.02~0.05 mg/L。
2.3 评价指标
成活率（%）= 100×（实验末虾尾数/实验初虾尾数）；
增重率（%）=（末均重－初均重）/初均重×100；
饲料系数= 摄食量/（末均重－初均重）
蛋白质效率=（末均重－初均重）/蛋白摄入量；
肝体比（%）= 肝重×100/体重；
出肉率（%）= 肌肉重×100/体重；
全虾体蛋白沉积率（%）= [（末均重×全虾粗蛋白含量）–（初均重×初始虾的全虾粗蛋白含量）]×100/蛋白摄入量。
2.4 数据统计分析
实验结果采用“平均数±标准差”表示，经单因子方差分析（one-way ANOVA）后，采用Duncan’s多重比较检验均值的差异显著性，差异显著性水平为0.05。统计软件采用SPSS 20.0 for Windows (SPSS, Chicago, IL, USA)。
3、实验结果
3.1 生长性能和形体指标
表2显示，饲料中添加龙须菜对凡纳滨对虾生长、饲料利用产生了明显的影响。当饲料中含有2%龙须菜（GL3组）时，凡纳滨对虾的终末均重（6.56 g）和增重率（2358.87%）最高，其次为3%龙须菜（GL4组）、对照组（GL1组）及其余三组终末均重和增重率均显著低于GL3和GL4组（P<0.05）。蛋白质效率和出肉率的变化趋势与增重率一致，而饲料系数则与之相反，GL3、GL4组饲料系数显著低于GL1、GL2、GL6组（P<0.05）。本实验的存活率没有受到饲料中龙须菜水平的影响（P>0.05），各组存活率均在96.67%以上。肝体比也没有受到饲料中龙须菜水平的影响（P>0.05）。
3.2 全虾体成分、肌肉成分及肌肉氨基酸组成
由表3可知，全虾体成分和肌肉成分没有随着饲料中龙须菜水平的增加而发生显著变化（P>0.05）。尽管全虾和肌肉粗蛋白含量均没有受到饲料中龙须菜水平的影响，但是全虾蛋白沉积率随着饲料中龙须菜水平的增加呈现先上升后下降的趋势，最高值出现在GL4组（23.38%），其次是GL3组（22.69%），并且在GL3和GL4组显著高于其他各组（P<0.05）。
实验虾肌肉氨基酸组成见表4。饲料中龙须菜水平对凡纳滨对虾各种氨基酸含量（苏氨酸除外）、氨基酸总量、必需氨基酸总量和鲜味氨基酸总量均没有显著性影响（P>0.05），但是必需氨基酸总量和鲜味氨基酸总量均有先升高后降低的趋势，两者均在GL3组最大。
3.3 血淋巴生化指标
饲料中添加龙须菜对凡纳滨对虾幼虾血淋巴生化指标的影响结果见表5，其中，AST、ALT和SOD活性随着饲料中龙须菜水平的增加发生了显著变化（P<0.05）。AST和ALT活性均随着龙须菜水平的增加而出现先下降后上升的趋势，两者最低值均出现在GL3组（分别为178.20和196.87U/L），GL3和GL4组的AST活性显著低于GL1、GL2和GL6组，GL3组的ALT活性亦显著低于其余各组（P<0.05）。血淋巴中SOD活性变化情况正好相反，随着龙须菜添加水平的增加呈现先上升后下降的趋势，最高活性同样出现在GL3组（95.33U/L），GL3、GL4和GL5组的活性显著高于GL1、GL2和GL6组（P<0.05）。其他各项血淋巴指标在各组间均没有显著差异（P>0.05）。
3.4 肠道形态
透射电子显微镜分析表明，较对照组，饲料中添加2％龙须菜可以增加凡纳滨对虾肠微绒毛长度及密度。此外，2％龙须菜组虾肠微绒毛排列更整齐，完整性更佳（图1）。
图1 透射电子显微镜下凡纳滨对虾肠道形态。
（a）8周后对照组的肠道形态，微绒毛平均长度为0.86±0.06μm。
（b）2%龙须菜组的肠道形态，微绒毛平均长度为1.72±0.26μm。
4、讨论
本实验中，龙须菜粉碳水化合物含量在60%以上，蛋白含量为19.17%，高于其他海藻如石莼（17.6%）、团扇藻（17.4%）和浒苔（13.6%），但低于凹顶钝藻（24.5%）(Yousif等, 2004)。丰富的碳水化合物含量和相对较高的蛋白含量，表明龙须菜可作为潜在的饲料原料应用于水产动物中。
很多研究报道证实，饲料中添加海藻粉对生长性能的作用因研究对象的不同而各有差异。Appler等（1983）报道了饲料添加5%的刚毛藻，尼罗罗非鱼的生长效果优于未添加刚毛藻的对照组。然而，饲料中添加10%的水网藻会减慢尼罗罗非鱼的生长速度，此外大大降低了饲料的表观消化率（Appler, 1985）。同样地，饲料中添加16%或33%的紫菜会明显降低鲻鱼的生长性能（Davies等, 1997）。在虹鳟饲料中，10%的紫菜粉不会影响虹鳟的增重率和饲料系数（Soler-Vila等, 2009）。Yousif等（2004）研究表明，蓝子鱼的生长效果和饲料利用率随着饲料中浒苔含量的增加（10%、20%、30%）而逐渐变差。本实验中，饲料中适宜含量的龙须菜粉能显著提高凡纳滨对虾的生长性能和饲料利用效率，添加2%~3%的龙须菜粉能显著提高凡纳滨对虾的增重率、蛋白质效率和出肉率，降低饲料系数，其中2%添加组的增重率、蛋白质效率和出肉率最高。类似地，潘国瑛等（1997）认为石莼藻粉的最佳添加量为2%，在此添加量下，虾的增长和增重均达到最高值；随着石莼藻粉含量的继续增加，虾的体增长和体增重反而下降。但是周歧存等（2001）在研究海藻对罗氏沼虾生长的实验中认为以生长为指标，饲料中藻粉的最适添加量应为3%。
本研究中，饲料添加1%~5%的龙须菜粉不会影响凡纳滨对虾全虾和肌肉组成成分。同样地，有研究表明，饲料中添加33%的龙须菜不影响蓝子鱼营养成分（Xu等，2011），饲料中添加16%或33%的紫菜不会影响鲻鱼的营养成分（Davies等，1997)。相反，El-Sayed（1992）研究表明，尼罗罗非鱼蛋白质和脂肪含量随着饲料中满江红添加比例的增加呈负相关，而灰分含量呈正相关。Soler-Vila等（2009）研究表明饲料中10%的紫菜能显著提高虹鳟鱼体蛋白质含量。在本实验中尽管全虾和肌肉粗蛋白含量均没有受到饲料中龙须菜含量变化的明显影响，但是全虾蛋白沉积率随着饲料中龙须菜含量的增加呈现先上升后下降的趋势，2%组和3%组的全虾蛋白沉积率显著高于其他各组。肌肉氨基酸除苏氨酸含量有差异外，添加1%-5%的龙须菜粉到饲料中对凡纳滨对虾肌肉大部分氨基酸成分没有显著影响。
动物体组织细胞机能改变和机体新陈代谢的变化是生化指标变化的基础，而生化指标的变化是反映动物体内某些组织器官机能状态变化和物质代谢的一个重要特征（董淑丽等, 2004）。AST和ALT在机体蛋白质代谢中具有重要作用，在肝细胞中含量丰富，肝细胞受到损害后，AST和ALT就会被释放到血液中，使血中AST和ALT活性增加，故血清AST和ALT活性变化可作为肝细胞受损伤的主要指标。本研究结果显示，饲料中添加2%~3%龙须菜粉，凡纳滨对虾血淋巴中的AST和ALT活性显著低于对照组，说明饲料中龙须菜水平会显著影响实验虾的肝胰腺功能，适当的饲料龙须菜水平有助于维持肝胰腺的正常生理功能。SOD是生物体内行使抗氧化功能的酶，可消除体内多余的自由基，保持自由基的形成与消除平衡，对增强吞噬细胞的防御能力和机体的免疫功能具有重要作用。本实验中，饲料中添加2%~4%龙须菜粉，凡纳滨对虾血淋巴中的SOD活性显著高于其他各组，这表明饲料中适当的龙须菜水平能增强凡纳滨对虾的机体免疫功能。同样地，Xu等（2011）发现在蓝子鱼饲料中添加33%的龙须菜粉，蓝子鱼的存活率及一些非特异性免疫指标（SOD、溶菌酶和ACH50）与对照组相近或优于对照组。
肠道是水生动物的重要消化器官，肠道微绒毛密度和长度的增加可增大肠道的吸收面积（Sang等, 2010; Daniels等, 2010）。在本实验中，电镜检测显示，饲料中添加2%龙须菜粉可显著提高凡纳滨对虾的肠道微绒毛的密度和长度，与已有其它海藻的研究结果相似。Niu等（2015）的研究结果显示，饲料中添加裙带菜可显著增加斑节对虾幼虾的肠道表面积。以往的研究表明，饲料中补充多糖可增加水生动物肠微绒毛结构及吸收表面积，这可能是海藻能提高养分利用，促进生长性能的主要原因之一。Sang等（2010）证明摄入多糖能显著提高的锦绣龙虾（P. ornatus）的肠道内周边/外周长比。Daniels等（2010）在幼虫和后期幼体欧洲龙虾（H. gammarus）也发现了类似的结果。在本实验中，与未添加龙须菜组相比较，喂食2％龙须菜组凡纳滨对虾肠微绒毛长度更长，密度更大，与生长性能相一致。在未来工作中，需进一步明确龙须菜增加肠道微绒毛密度和长度的生理学机理。
5、小结
本实验研究表明，饲料中适宜的龙须菜添加水平能显著提高凡纳滨对虾的增重率、蛋白质效率、出肉率和血淋巴SOD活性，显著降低饲料系数、血淋巴AST、ALT活性。此外，饲料中添加2%的龙须菜粉使凡纳滨对虾肠道微绒毛长度及密度均比对照组高。因此，龙须菜粉对凡纳滨对虾生长、免疫和肠道健康都有一定的促进作用。（完）
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