甲鱼常见疾病的实验室检查与诊断
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检查的目的是了解疾病的症状,找出病原体,为诊断奠定基础。检查分为身体检查、尸体解剖和实验室检查。下面介绍实验室检查。实验室检查的工作主要包括镜检、病毒分离、细菌培养、生化试验和电镜观察。
1.镜检:整个实验室检查随时都会用到镜检,但第一次镜检的目的是检查是否有寄生虫。采用玻片压片法制作玻片,取材部位为体表和内脏的粘液、病变和血液,然后在显微镜下观察。
2.病毒分离:检测病毒的方法有很多。这里介绍一种比较简单的方法,取患病甲鱼的脑、肝、脾、肾、胆等内脏,用无菌生理盐水冲洗2-3次,切块,在均质机中匀浆,加入含有200单位(微克)/毫升青霉素和链霉素的汉克氏液,制成10%-20%的组织悬液。7天后,将感染的培养细胞冻融一次,吸收1 ml细胞冻融液,盲传至另一瓶正常传代细胞,为第一代。盲传3-4代后,将病毒的细胞培养物吸附在铜网上,用2%磷钨酸负染,电镜下观察病毒颗粒。同时通过病毒核酸类型鉴定、耐酸试验、耐醚试验等理化特性试验,对病毒进行了综合鉴定。
如果只是想知道疾病是否由病毒引起,而不需要知道是哪种病毒,有一种更简单方便的方法:取病甲鱼的肝、肾、脾等组织,用灭菌生理盐水冲洗2-3次,切成组织悬液,加入青霉素和链霉素各1000 IU/ml,作用一段时间,离心上清液,按各0.2 ml的量注射到健康甲鱼体内。
3.细菌的分离:无菌操作取病鳖体表病变及内脏器官病变组织,反复插入接种环,交叉接种于营养琼脂平板上,于30培养箱中培养24小时,观察各菌落形态,取各菌落涂片,革兰氏染色后在显微镜下观察细菌形态。同时,挑取各菌落在营养琼脂平板和新鲜鸡血琼脂平板上划线,30纯化。培养24小时后涂片,革兰氏染色和鞭毛染色,显微镜下观察细菌的形态结构。有条件的地方可在铜网上做细菌培养,用2%磷钨酸(pH 7.0)负染后,在电镜下可观察到细菌的微细结构。
然后对每个菌株进行各种生理生化试验,确定其生长温度和各种理化特性。
最后根据菌落的颜色、大小、溶血、形态、大小、生长温度及各种理化特性,并参考《一般细菌常用鉴定方法》、《伯杰氏细菌鉴定手册》、《动物微生物学》、《水产动物疾病学》等书籍资料,确定了病原体的名称。有条件的地方,最好增加一步动物感染试验和甲鱼感染试验,以确定几个菌株中哪一个或几个是主要病原体。
在此基础上,可分别进行几种细菌的药敏试验,以确定治疗药物。
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