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【2014年新文章】关于南美白对虾白粪综合征

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在养虾的过程中,我们会遇到各种各样的问题。只有不断学习和积累养虾的相关知识和经验,才能合理解决问题。

白便综合征2014年新文章

SriurairatanaS,BoonyawiwatV,GangnonngiwW等。whitefecesssyndromeofshrimparises from transformation,sloughing and aggregation of hepatopancreactionicmicrovilliintowerformbodiess officially resellengregarines。[J]。PlosOne,2014,9(6):e99170。

摘要:随着急性肝胰腺坏死(AHPND)在亚洲的蔓延,蠕虫如蜂群一样开始在虾的肝胰腺和肠道内扩散。这种寄生虫病常伴有白色粪便,称为白便综合征(WFS)。对新鲜肝胰腺组织进行染色涂片,我们可以发现该蠕虫几乎是透明的,其管宽和直径与肝胰腺小管相似。然而,虽然发现了蠕虫状物质,但没有发现细胞结构。在高倍放大(LM和40-100x靶)下观察,它是一层膜包围的加厚交叉折叠膜的复合物。透射电镜发现,这种蠕虫的孔的无层膜不同于已知蠕虫、其他原生动物或后生动物的质膜和外层。未发现线粒体、细胞核、内质网和核糖体等亚细胞器。内膜只有管状亚结构,偶尔含有全B细胞,从肝胰腺小管上皮细胞脱落。这些内膜显示微绒毛从肝胰腺小管上皮细胞脱落,然后聚集在管腔内。当微绒毛脱落时,原来的细胞就裂开了。相反,B细胞保持完整或独立完整地从小管上皮脱落。光镜下,脱落的微绒毛聚集在B细胞周围时,可能会被误认为是囊肿样结构,使其看起来像一条丛虫。ATM(蠕虫)的起源目前尚不清楚,但微绒毛的脱落和随后的细胞溶解表明其形成是一个病理过程。一旦更严重,ATM可能会延缓虾的生长,并可能使虾对条件致病菌敏感。因此,ATM的病因及其与急性肝胰腺坏死(如果有的话)的关系需要进一步研究和确定。

本文断断续续用了六年时间发现,白便是肝胰腺脱落的微绒毛,然后聚集成蠕虫,其表面看起来像一簇蠕虫。起初我只是研究现象,后来我在研究各种已知的来自病毒、细菌、真菌和寄生虫以及虾的病原体时观察到了ATM。但直到最近,这种现象还与ATM联系在一起,使它们成为一个连贯的整体。为了找出它们之间的关系,我们进行了深入的研究。

自2009年以来,特别是自2011年以来,研究了数百个虾标本,试图确定急性肝胰腺坏死(AHPND)与其之间的关系。近年来,虾病给亚洲养虾业造成了严重的损失。甲型H1N1流感的爆发始于南美白对虾、斑节对虾和中国对虾。2009年中国爆发南美白对虾AHPND后,逐渐蔓延至越南(2010年)、马来西亚(2011年)和泰国(2012年),虽然当时具体病因不明。事实上,直到2011年才首次被定义为AHPND(急性肝胰腺坏死综合征或AHPNS)。2011年6月,它是由来自亚利桑那大学的Lightner(未发表)在河内由越南动物卫生部门组织的研讨会上提出的。随后,在2012年1月和2月,它被全球水产养殖倡导杂志定义为早期死亡综合征(EMS)。后来,在同一年,亚太地区的水产养殖中心(NACA)汇编了一份疾病证明,并在其网站(www.enaca.org)上提供。最后,2013年发现了病原体(仅副溶血弧菌)[1]。该病的独特诊断特征是许多小管上皮细胞从虾肝胰腺的内侧脱落。目前,它被认为是来自虾胃的一种未知结果的病原菌毒素。目前诊断仍依赖于大量HP细胞脱落的组织学诊断。数百只虾疑似感染AHPND,主要观察头部和胸部组织切片,主要集中在虾的肝胰腺。在这项工作的过程中,遇到并记录了各种其他肝胰腺病原体,但不常报道。这里发现了一个越来越普遍的异常现象。在斑节对虾和南美白对虾肝胰腺、胃和肠连接处的小管中发现蠕虫状小体,表面看似一簇蠕虫。他们有时会产生大量的白色粪便,这就是所谓的白粪综合征(WFS)。池塘养虾大约是2个月前开始的,他们最初以为是丛虫引起的白色粪便[2]。据估计,2010年WFP对泰国的损失为10%-15%,主要是降低了虾的成活率和规格,而且这个估计还不包括每年白斑病对泰国造成的正常损失。在这里,我们用光学显微镜和电子显微镜详细研究了蠕虫,它表明它们不是独立的有机体,而是一个编队的集合。微绒毛转化(ATM)是指虾的肝胰腺小管上皮细胞从其上脱落,然后聚集在肝胰腺与肠道的交界处,再通过肠道粪便排出体外。

A浮粪B大便C白肠D金褐色肠E大便显微镜低倍显微镜显示三条蠕虫,其中一条很小。

管内 b高倍镜下可见蠕虫状体内有B细胞 c用孟加拉红给蠕虫状体染色,在高倍镜下观察其内部膜结构。
  肝胰腺组织涂片染色,HE染色揭示ATM。显微照片清楚地显示蠕虫状形态,ATM内部或游离的囊肿样的内容。
  结果:
  左图)a细小碎片b早期聚合c中期聚合d压缩e在肠道附近聚集f肠道内真实的族虫,细胞核突出
  右图)虾的肝胰腺HP组织切片甲苯胺蓝染色。(a)一个HP小管的远端末端截面显示在隐窝上有密集的染色颗粒,由细管管腔微绒毛在转化ATM时形成。注意微绒毛层所有的细胞是完整的。 (b)HP小管处脱落,微绒毛正在转化中。 (c)一个B-细胞从HP小管上脱落,有正常和正在转化的微绒毛,还有一个在裂解的细胞 (d)在高放大倍率下的蠕虫状体ATM,有些包裹B-细胞,在ATM周围有很多碎片。
  TEM(投射电镜)的微绒毛转化和脱落的步骤。 (a)HP小管上皮细胞的低倍率显示正常和转化的微绒毛和两个脱落细胞的裂解。表明早期是由一层膜包围的。(b)低倍率下,部分微绒毛脱落,细胞裂解前的情况和未脱落的B细胞 (c)高倍率下,清楚地显示出正常和转化、脱落的微绒毛之间的不同。 (d)高倍率下HP小管上皮细胞的转化和脱落。
  TEM(投射电镜)在HP小管隐窝中不寻常的电子致密颗粒。(A)低倍率下,HP小管内可变形的不知名的电子致密颗粒(B)高倍率下,上皮微绒毛上有一个颗粒,可能是之前进入的细胞。 (C)高倍率下,微绒毛上皮细胞里面有电子致密颗粒,它旁边邻近的微绒毛表层细胞的形状发生了变化 (D)低倍镜下,一个小管上皮细胞内有很多电子致密颗粒,其绒毛在转化的前期。
  讨论:
  在我们用电镜揭示ATM的起源以前,我们用光镜发现其跟簇虫相似。那时一个关于簇虫的文献表明,在虾中还从来没报道过簇虫,当然也包括泰国发表的那篇与簇虫很相似的ATM。具体来说,它们缺乏动力,并没有表现出细胞器,如通常突出的原子核。从后续电子显微镜的结果确认:ATM没有细胞核和簇虫常有的超微结构(例如,复杂的膜结构,线粒体,核糖体等)。但是,我们发现了一个同约翰逊以前的研究相似的现象。她在螃蟹的肝胰腺小管中偶尔会发现透明的薄膜状的物质,她认为这个物质是从微绒毛上皮产生的。但她没有给出它们形成的细节,并表示无法解释它们的功能或意义,无法断定它们是否的一个正常的过程或是结果某种罕见的病理。我们虾的ATM形态特征与约翰逊螃蟹中的不明物质很相似,特别是投射电镜图。我们在其它甲壳动物的公开刊物中没找到类似的物质。当ATM的发生严重时,它可以导致虾形成白色粪便,如果很多同池的虾同时表现出这种现象,它可以导致浮便,有时会漂浮堆积(即白粪便综合征或WFS)。它通常出现在虾养殖2个月的时候,并可能伴有较高的死亡率。然而,ATM有时与虾的肝胰腺疾病如AHPND、弧菌病及对虾肠微孢子虫一起出现。导致的结果是,在越南WFS被认为是对虾肠微孢子虫导致的[17]。但这随后在泰国的自然感染和实验室研究实验中表明不太可能是孢子虫导致的[18]。因此,可以肯定的是,严重的WFS是大规模形成ATM导致的。然而,ATM形成的原因仍然是个谜,希望更多人能够去研究它的特性和形成机制。总的来说,我们的工作表明,ATM是由小管上皮细胞脱落,裂解,导致微绒毛转化而形成的。这表明ATM的形成是一种病理过程。事实上,现在通过活虾的HP组织涂片,很容易就发现了它。以前ATM在虾中没有发现,可能是流行率比较低的原因,正如先前约翰逊报道螃蟹也一样[16]。然而,它们在亚洲流行越来越严重,就不能忽视这个问题了。明显的是ATM的流行于AHPND暴发流行有关系。虽然这可能有一定的因果关系,但同时也出现了肝胰腺的微孢子虫和AHPND一起流行的情况,但现在我们知道,当AHPND没有感染细菌时,微孢子虫与ATM的因果关系的可能性不大 [1]。而亲虾和仔虾的感染会导致微孢子虫和AHPND细菌增加虾的发病率。这个观点可以找到一点依据,泰国一些虾农收到同一批S P F 仔虾,但它们或多或少在同一时间暴发了AHPND。我们的研究也可以说明,一些地方性的微孢子虫可以在南美白对虾亲虾和仔虾时感染,这应该是来源于美国,但却从未报道过 [18]。
  总之以前的信息表明,虾孵化场的生物安全措施没有做到位,像外来的和当地的病原体都没排除干净。因此,对于ATM,我们必须考虑两个可能性。无论它们感染了类似AHPND和微孢子虫时,或它们感染了多种病原体但交替的表现不同病源病症。例如,已经报道,AHPND细菌产生一种强效的毒素能引起肝胰腺小管上皮细胞脱落[1]。在没有细胞脱落时,低剂量的毒素能否导致ATM?为了测试这后一种可能性,实验室用病原体细菌的稀释毒素建立了感染模型 [1]。当出现新的病原体时,不管虾中有或没有ATM]时 ,对其基因组进行对比分析是比较有效的。或者,电子致密颗粒与微绒毛的转化有有关的,这个可以作为一个研究方向。比如,可以用物理手段将它们分离出来。通过组织匀浆,差速离心和过滤,之后对它进一步分析。最后,我们通过透射电镜发现,ATM的表面结构跟簇虫很像。现在在亚洲养殖的虾的肝胰腺体内常发现不是独立有机体的物质。它是由HP小管的上皮细胞的脱落和聚合,微绒毛转化时形成的。裸露的上皮细胞随后裂解,表明该过程对虾的生长和存活有负面影响。严重时可导致白便综合症(WFS)。需要进一步研究ATM产生的原因,并评估其对虾养殖业生产的影响。

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