泥鳅是一种反复产卵的鱼。在自然条件下，4月初开始繁殖，5-6月为产卵高峰期，至9月仍可产卵。养殖水温为18-30，最适水温为22-28。

雌泥鳅的性成熟比雄泥鳅晚。雌泥鳅长到5厘米时，体内有一对卵巢。雌泥鳅长到8厘米时，两个卵巢愈合在一起，形成一个卵巢，从前端延伸到后端。此时整个卵巢开始成熟。

雌泥鳅受孕的卵量因个体大小而有很大差异。最小的成熟个体体长8厘米，卵约2000粒，10厘米为7000-10000粒，12厘米为12000-14000粒，15厘米为15000-18000粒，20厘米为24000粒。最大的蛋数可以超过65000个。卵圆形，卵径约0.8-1.0毫米，吸水后膨大至1.3-1.5毫米。黄色，半粘性，附着力不强。因为卵子在卵巢中的成熟度不同，每次排卵的量大约是受孕卵子数的50%-60%。

雄性泥鳅最小成熟体长大于6 cm，性成熟早于雌性泥鳅。雄性泥鳅有一对睾丸，位于腹腔两侧，呈带状，不对称。右侧的睾丸比左侧的更长更窄，重量也更轻。当雄性泥鳅长到9-11厘米时，睾丸中的精子约有1亿个。

泥鳅喜欢在雨后阳光明媚的早晨产卵。产卵前，雌性会游到它们前面。几只雄性在后面追赶它们。在发情期，雄性和雌性大多在水面和鱼巢周围活动。当发情期达到高潮时，它们的头和身体互相摩擦，相继游出水面。公泥鳅追逐缠绕母泥鳅，将其缠绕在母泥鳅腹部，刺激母泥鳅产卵。同时，雄性泥鳅也排出精子进行体外受精。这个动作因个体大小而异，次数在10次以上。受精卵先附着在水生植物或其他附着物上，随着水的波动，很容易从附着物上脱落，沉入水底。