荧光细菌原来是这样感染健康的南美白对虾的
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今年苏罗迪台风后,福建长乐对虾夜光病严重。笔者主要采用病原分离和人工感染的方法探索荧光细菌的感染途径,并提出初步的防治方法。
为了提高对虾养殖产量,有必要认真研究对虾养殖技术。在学习对虾养殖技术的过程中,逐渐积累了很多以前不知道的经验和方法,对提高对虾养殖产量有很大的帮助。
健康大虾:胃、肝、胰饱满,体色透明。
对虾发光病是对虾养殖中常见的细菌性疾病,具有发病快、传播广、传染性强、死亡率高、不易控制等特点,是对虾养殖过程中危害最大的疫病之一。在我国,对虾发光病主要发生在福建、广东、广西等沿海地区,主要危害南美白对虾和对虾。目前研究表明,引起对虾发光病的病原体有五种:霍乱弧菌、灿烂弧菌、火神弧菌、哈维弧菌和费氏弧菌,但主要原因是哈维弧菌感染。
今年苏罗迪台风后,福建长乐对虾夜光病严重。笔者主要采用病原分离和人工感染的方法探索荧光细菌的感染途径,并提出初步的防治方法。第一,研究方法
1.细菌的分离
从福建长乐某养殖场采集的死发光病虾,用75%乙醇消毒,然后在超净工作台上用无菌手术刀切开病虾的腹肌。用TSA和TCBS固体培养基划线分离肌肉,30培养24小时后观察菌落生长。
选择TSA和TCBS培养基上的典型菌落,然后分别接种到含2%NaCl的TSB中。在30振荡培养10小时后,用OD560测定细菌浓度,然后分别饲喂。每克饲料中的细菌数量为106cfu,每组40个。对照组直接投喂,南美白对虾在蓝色玻璃桶(0.3m3)中饲养。
2.人工感染
将来自长乐某养殖场的健康对虾(体长6-8cm)饲养在蓝色玻璃钢桶(0.3m3)中。养殖用水为沙滤水,盐度30,水温22-24,养殖4天,每组30只。
(1)摄食感染:将试验菌株的菌悬液(108cfu/mL)混合制成试验对虾饵料,浓度分别为102cfu/g、104cfu/g和106cfu/g。饲养观察5天后,记录对虾的死亡情况和症状,并及时清除死亡对虾。
(2)伤口浸泡感染:将活化后的新鲜试验菌悬液(108cfu/mL)加入试验用蓝色玻璃钢桶中,充气搅拌至海水分别为102cfu/mL、104cfu/mL、106cfu/mL,然后用针刺穿健康试验对虾的腹部肌肉,伤后放入带菌海水中。
(3)普通浸泡感染:方法同(2),只是实验虾不刺,直接放入有细菌的海水中。
重度感染(感染后第2、3天):游泳缓慢,胃炎明显,肝胰腺萎缩,体色明显发红。
1.感染的隔离和消退
从病虾中分离纯化出三个优势菌株,A-1、A-2和A-3。在TCBS培养基上的颜色分别为绿色、黄色和黑色,只有菌株A-1在暗室中显示淡绿色荧光。回归感染试验证实,A-1能引起南美白对虾死亡,死虾发光,其症状与自然发生的成虾相同,而其他优势菌不能使死虾发光,因此证实该菌株是虾发光的病原菌之一。
2.人工感染
(1)喂养感染:混合物料喂养感染实验结果见表1。结果表明,对照组在实验过程中无一例死亡。102cfu/g组,第三天对虾开始死亡,实验结束时死亡22只,占73.3%。104cfu/g组第2天开始死亡,t
(2)伤口浸浴感染:伤口浸浴感染的实验结果见表2。结果显示,对照组无一例死亡。102cfu/mL组第4天开始死亡,实验结束时死亡20只,占66.7%。104cfu/mL第三天开始死亡,实验结束时死亡25只,占83.3%。106cfu/mL组第二天开始死亡,实验结束时全部死亡。可见,水中荧光细菌的数量与虾的死亡率呈正相关。
(3)常见浸浴感染:常见浸浴感染的实验结果见表3。结果表明,对照组、102cfu/mL组和104cfu/mL组无一例死亡。106cfu/mL组第4天死亡2只,占6.7%。可见,健康的对虾在含有荧光细菌的海水中不易被感染。三。讨论
摄食感染实验结果表明,即使饲料中含有少量发光细菌,对虾在短时间内仍可大量死亡,说明摄食感染是荧光细菌感染健康对虾最主要的感染方式。
对虾的捕捉、运输、惊吓和频繁活动都可能对对虾造成创伤。发光细菌侵入对虾体内后,利用生物体组织作为营养物质进行大量繁殖,在荧光素酶的作用下,被还原的荧光素被氧化成氧化荧光素,同时发出荧光,所以我们可以看到对虾的局部组织呈白色发光。大量发光细菌随着虾体的循环系统逐渐侵入整个虾体。
身器官,遍布全身就使得虾体全身死亡并发光。创伤感染的实验结果表明,当水体中的荧光菌含量在102cfu/mL,仍然会有超过60%的虾发病死亡,这说明创伤感染也是荧光菌感染健康对虾的一种重要途径。本研究中普通浸浴感染的实验结果表明,当荧光菌浓度浓度达到106cfu/mL,会导致少量对虾死亡,而当浓度低于104cfu/mL时,不会引起对虾死亡,在高位池中荧光菌数量一般不会超过102cfu/mL,所以说健康对虾在含有荧光菌的虾池较难感染发病,这说明普通浸浴感染不是引起对虾发光的主要途径。
因此,防治南美白对虾成虾发光病需从切断摄食感染和创伤浸浴感染途径着手。
在高位池中,可先进行消毒,后加芽孢杆菌、光合细菌,同时投喂优质饲料的方法来切断这两种主要的感染途径。消毒的作用是杀死病虾、弱虾、虾创伤部位的细菌和养殖环境中细菌,减少病原体的来源;消毒后及时捞起死虾,避免摄食感染;加芽孢杆菌、光合细菌的作用是消毒导致养殖环境中细菌大量死亡,养殖水体的菌相处于“真空”状态,添加有益细菌,能够迅速占据有害细菌的生态位,使有害菌处于被抑制的状态;投喂优质饲料的目的是提高养殖对虾的健康程度,尤其是提高对虾的免疫力,有效降低感染的概率。
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