链球菌病是罗非鱼的主要细菌性疾病，由乳链球菌和海豚链球菌引起。受感染的罗非鱼通常表现出以下症状：转圈或游圈、眼球突出、眼睛充血、腹部肿胀、肛门红肿。组织病理学表现包括鳃充血、肾损害、肿胀、白细胞浸润、肝颗粒变性、肠粘膜上皮变性、坏死、脱落、固有层上的炎性白细胞浸润以及脉络膜和眼眶骨膜的炎性坏死。

目前公认的是无乳链球菌通过口腔进入罗非鱼的胃肠引起感染。今天我给大家带来的这篇文章，就是直观的向大家展示无乳链球菌是如何粘附和感染罗非鱼肠道黏膜的。引用的信息如下：

结果如下：

1.罗非鱼的肠道体外培养在含10%BSA的DMEM培养基中，宏观上保证了肠道器官的管状三维结构，并保持稳定120分钟(图1)。240分钟后出现坏死(图2)。

图1健康罗非鱼体外肠道培养120分钟(HE染色，100倍)；图2健康罗非鱼体外肠道培养240分钟(HE染色，100倍)。

2.研究无乳链球菌对罗非鱼肠黏膜粘附和侵袭的形态学特征。

1)确定无乳链球菌的最佳浓度和孵育时间：在109CFU/mL的浓度下孵育40min。

图3无乳链球菌粘附与细菌浓度和培养时间的关系

2)无乳链球菌20分钟开始出现在肠腔内，40分钟聚集在肠上皮细胞内(图4)，并呈链状和团状结构。核杂质和常染色质的清晰区分及核仁的存在，表明肠上皮细胞状态良好，而粘液细胞几乎无反应(用星号表示)，箭头表示上皮内淋巴细胞。

图4无乳链球菌感染罗非鱼肠道40分钟(he染色，1000倍)。

3)正常情况下，无乳链球菌的表面会覆盖棉花的荚膜结构。本研究通过透射电镜(MET)观察到，无乳链球菌在黏附过程中，其被膜消失，或者只剩下一部分在黏附接触面的另一侧(图5)，而一旦附着在上皮细胞的微绒毛上，无乳链球菌会相互分离，释放出链状结构(图6)，此外，无乳链球菌甚至会与微绒毛的尖端连接(图7)。

图5米28000倍；图6米32000倍；图7MET28000X

4)无乳链球菌感染肠道外植体，外植体黏膜层发生变化。无乳链球菌粘附在肠壁上，并集中在肠外植体折叠的顶部(图8)。在感染过程中，无乳链球菌主要通过上皮细胞进入罗非鱼的肠道固有层，但这一过程不是由单一链球菌引起的，而是有一群链球菌参与其中(图9)。当进入肠上皮细胞的细胞质时，链球菌仍被包裹，并能继续分裂和复制(图10)。

图8无乳链球菌集中在肠褶中。

图9大量无乳链球菌穿过上皮细胞

图10肠细胞胞质中有许多游离的无乳链球菌，部分处于分裂状态(箭头)。

结论：无乳链球菌的粘附和感染主要始于肠襞顶部。在感染的早期阶段，无乳链球菌需要脱落其荚膜才能与肠上皮细胞相互作用，这在链球菌中很常见。本实验中，乳酸链球菌没有粘附和感染固有层，粘膜细胞和淋巴细胞都没有产生免疫反应，肠道细胞的细胞质中存在大量的链球菌，这些细胞没有出现明显的病变和死亡。