副猪嗜血杆菌的诊断主要包括临床诊断和快速聚合酶链反应(PCR)诊断技术：

1临床诊断

首先，病猪侧躺着，腹式呼吸极其微弱。不仔细观察，很难看出任何呼吸动作。因为副猪嗜血杆菌病会导致心脏衰竭，大多在深夜死亡，所以早上经常会发现死猪。

其次，多细胞渗出性浆膜炎所有器官的浆膜表面均有白色纤维素渗出，特别是“绒毛状心”可作为特征性诊断。

第三，胸腔、腹腔、心包有大量浑浊的积液。第四，关节不一定肿，大多是整条腿都肿了，切开就能看到皮下水肿。有些猪的关节囊渗出严重，有时关节囊被刺破，囊内液体可喷出。

2.快速PCR诊断技术。

疾病的诊断通常基于对畜群历史的调查。需要在临床症状和尸检的基础上进行细菌分离培养，但往往不成功。这是因为副猪嗜血杆菌非常娇气，与标本中可能同时出现的其他细菌相比，很难满足其生长需要。根据回归分析，副猪嗜血杆菌的真实发病率可能是实际诊断的10倍之多，部分原因是无法确认采集的样本中是否存在副猪嗜血杆菌。研究人员不仅要对有严重临床症状和损伤的猪进行尸检，而且要在应用抗生素之前，对疾病急性期的猪进行细菌分离和鉴定。即使损伤轻微或不明显，也应分离培养细菌，选择浆膜表面物质或渗出脑脊液、心脏血液。虽然常规诊断困难，但在含有抗生素的选择性培养基上接种后，通过特殊的稀释技术，可以从呼吸道采集的样本中成功培养出大量细菌。目前，华中农业大学动物病毒实验室建立了副猪嗜血杆菌快速聚合酶链反应诊断技术，可以对该病做出快速诊断。

副猪嗜血杆菌可以通过生化检测从其NAD-或因子V-依赖的微生物中鉴别出来。有时，其他依赖NAD的细菌(嗜血杆菌、猪放线菌和吲哚放线菌)被误认为是嗜血杆菌。这些细菌大量存在于副鼻窦、扁桃体或肺部，但仅具有低致病性。

几个副猪嗜血杆菌菌株或血清型出现在一个猪群中并不少见，甚至在同一头猪的不同标本中也能发现不同的菌株或血清型。血清学诊断主要包括琼脂扩散试验、补体结合试验和间接血凝试验。

诊断应区分副猪嗜血杆菌和脓毒性细菌感染。能引起脓毒性感染的细菌包括链球菌、丹毒、猪放线杆菌、猪霍乱沙门氏菌、胸膜肺炎放线杆菌和大肠杆菌。此外，3-10周龄猪的多血管炎和关节炎可引起类似副猪嗜血杆菌感染的损害。只有区分这些疾病，才能认识到副猪嗜血杆菌在支气管肺炎中的作用，有利于后期的诊断。