folin酚法测定蛋白质的原理 folin酚法测定蛋白质的原理及范围
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原理:蛋白酶水解酪蛋白生成酪氨酸。在碱性条件下,蛋白质中的肽键与铜结合形成复合物。在福林-苯酚试剂中,磷多酸盐-磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基还原生成深蓝色物质,在一定条件下,蓝色深度与蛋白质的含量呈正相关。
福林酚法显色原理与双缩脲法相同,但增加了第二种试剂,即福林酚试剂,以增加显色量,从而提高蛋白质检测的灵敏度。
注:在测定中,加入福林-酚试剂时要特别注意,因为该试剂只有在酸性pH条件下才稳定,而上述还原反应仅在pH=10时才发生,所以福林-酚试剂加入碱性铜蛋白溶液时,必须立即混合,使磷钼酸盐-磷钨酸盐试剂未被破坏前,即可发生还原反应。
溶液中含有硫酸铵,只需加入浓碳酸钠-氢氧化钠溶液,即可测定。如果样品酸度高,显色后颜色偏浅,则必须将碳酸钠-氢氧化钠溶液的浓度提高1~2倍。
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