1.取样和消毒

摘芽时间一般在冬季，此时褐变物质含量低，摘芽成活率高。但是，并不是所有的品种都可以这样处理，有的品种冬天不发芽。取样时，选择新的伪球茎(老球茎的生长点已停止发育，容易被污染)，从母株的生长部位剪下新茎，用流水冲洗，从外面依次剥下叶片，最后用尖刀将切口和污垢剪掉。消毒剂可以是酒精、漂白粉等。消毒时最好用带盖的瓶子，边消毒边摇晃，减少气泡的附着。消毒后用无菌水冲洗数次，然后按无菌操作要求取芽。选芽要选茎中间的大芽，因为它的成活率和生长速度都比较高。取芽有两种方式：3360，一种是拔毛。先把芽切掉，从下面的切口切掉一点，然后从上面轻轻按压，把芽挤出来。这样重复1 ~ 2次，就可以得到0。5 ~ 1.0mm(这种方法需要细心和熟练。切口太长会把生长点切掉，太短就挤不出来)；另一种方法是先将苞片叶与同样的液体培养物相连，然后去掉苞片叶，将只附着在周围组织上的生长点移到固体培养基上。后一种方法的成活率和发芽率都比较高。外植体的大小应为0。2-0.3 mm为排毒目的，0。4-0.6 mm，以达到增殖的目的，这取决于卡特兰的类型。其中，BLC型大卡特兰茎尖可达1。5-2.SLC型小卡特兰茎尖可带0。5-2.0毫米。

2.原始培养

对于原代培养，可选择的培养基为：ms 0。1mg/L NAA 10%椰奶2%蔗糖，或MS 1mg/L 6苄基腺嘌呤1。0毫克/升NAA固体培养基，或1/2毫秒(甘氨酸去除)0。1-1.0毫克/升NAA 0。基本培养基也可以是Nitsch、B5或Catland特殊培养基等。天然有机物的添加应根据具体情况通过实验确定。培养基的最佳pH值为5。5 ~ 6.0.

将采摘的生长点移植到液体培养基中静置培养，培养一周后更换培养液，三周后移至固体培养基中。初始培养温度为15 ~ 20时存活率最高，存活后25有利于增殖。多用途2 000 le连续照明。

3.鳞茎增殖和器官形成

最好尽快通过原代培养增殖原球茎。芽在培养基上培养2个月后，切成4片，转移到继代培养基上增殖，然后每隔一个月继代培养一次。卡特兰虽然能在液体静态培养中增殖，但质地疏松，时间过长，原球体会死亡。

预防的方法是液体培养和固体培养交替进行，交替时间为一个月左右。液体培养能抑制原球茎芽的分化，使原球茎大量增殖，而固体培养能使其生长健壮。芽未分化时，可移至液体培养基中，可抑制芽分化，使原球体增殖。反复的液体和固体培养可以使原球体无限增殖。但长期传代培养(3年以上)可能产生突变株。因此，为了产生与母株相似的幼苗，应对其继代培养进行限制。当固体培养基上形成的原球块被一个个分离转移到液体培养基上时，切面应尽可能小。原球茎增殖可用下列培养基：MS(附录表11) 0.1 ~ 5.0mg/L 6苄基腺嘌呤0.5 ~ 1.0mg/L NAA，或添加一些有机物如150g/L香蕉、150ml/L椰奶。

原球茎增殖到一定数量后，可转移到育苗培养基Knudson 0上。18毫克/升NAA 0。02毫克/升激动素0。175mg/L GA3 30g/L蔗糖6g/L琼脂，1 ~ 2个月后所有原球茎都能生根成苗。培养基为MS 0 . 11.0毫克/升激动素1。0 ~ 5.0毫克/升萘乙酸或MS 0。1 ~ 5.0毫克/升激动素0。1毫克/升的2，4二氯苯氧乙酸也可用于区分

当幼苗长到15 ~ 25 mm时，可转移到壮苗培养基上，促进茎、叶、根的生长。基本培养基中总离子浓度为30 ~ 35 mol/L，添加5% ~ 10%的香蕉，可作为幼苗培养的培养基。

瓶装苗可移入装有水苔或泥炭藓、珍珠盐、蛭石混合培养土的营养钵中，适宜温度为15 ~ 25。另外要进行遮荫栽培，夏季遮荫80%，冬季遮荫50%为宜。

5.褐变的发生与预防

卡特兰接种后易褐变，成活率低。褐变是多酚氧化酶在有氧条件下对酚类化合物作用的结果。引起褐变的物质的量与采芽时间和新茎的大小有关。

有：种防止褐变的措施。

(1)冬季和春季取样，选取长度为8-15厘米的新茎；

(2)消毒后用无菌水冲洗，并将材料在无菌水中切割，或在无菌水中浸泡1 ~ 2分钟；

(3)在培养基中添加50-100毫克/升的褐变抑制剂芦丁；

从培养开始到存活，温度保持在15 ~ 20。在25 ~ 30培养时，褐变物质大量渗出。

调节pH值至5 . 5；

外植体先进行液体培养，存活后转入固体培养。