中国兰花又名东方兰花，是兰科陆生兰类植物，是一个庞大的兰科植物家族中特有的珍稀物种。它是我国传统名花，花美、香淡雅，具有很高的观赏和经济价值，其中珍品众多，千金难求。而传统的分株繁殖，繁殖系数极低，带毒株数量大，物种退化。种子缺少胚乳和子叶，胚发育不完全，常规播种很难发芽。应用组织培养技术和快速繁殖技术是发展和壮大中国兰花产业的有效途径。

1.中国兰花茎尖和侧芽的组织培养技术。

(1)采样、消毒和接种

为了尽可能减少样品兰花携带的病菌，要采取特殊的管理措施，如放在避光防雨的地方，不施有机肥，幼芽刚出现时要暴露在土壤表面。切下6 ~ 13cm的芽苗(取样因品种而异)，用锋利的刀片除去2 ~ 3片根部、污物和包裹的叶子，并彻底洗净。

从材料上切下2 ~ 3厘米的茎，用10%的次氯酸钠溶液消毒10分钟。如果细菌严重，用0 .1%氯化汞和饱和漂白粉上清液交叉消毒。灭菌后用无菌水冲洗数次，然后放在灭菌的滤纸上吸干水分，再在解剖显微镜下剥离茎尖和腋芽。为了去除病毒，茎尖应低于0。2mm否则，2mm以上的茎尖可剥离两个袁烨基部，有利于成活。

(2)原球茎的诱导

茎尖的启动率和成功率高于侧芽。选择新芽长度的最佳方法是选择9 ~ 13 cm长的新芽，无论是茎尖还是侧芽。芽的诱导成功率最高。培养基的选择因品种而异。对于兰花品种，白1毫克/升6苄基腺嘌呤5毫克/升NAA 8 .5%椰奶；或B1 1 1毫克/升6苄基腺嘌呤2毫克/升萘乙酸。对于& quot夏回& quot，& quot秋苏& quot而其他品种，0。5毫克/升MS 6苄基腺嘌呤1毫克/升NAA 0 .5%活性炭培养基效果最好。接种后，兰花外植体在23 ~ 25的黑暗条件下培养。1 ~ 2个月后，它们可以分化成一个或几个乳白色的原球茎。解剖显微镜下观察到桑葚状的原球茎，然后变绿，再培养成根茎(或树突状簇)。中国兰花经原球茎诱导启动后易褐化死亡，死亡率有时高达3/4。因此，采取接种大块外植体、降低培养温度、采用暗培养、减少创面、添加褐变抑制剂(如聚乙烯吡咯烷酮、硫代硫酸钠、芸香科、柠檬酸等)等综合措施。)在培养基中或使用活性炭应采取减少褐变的不利影响。

(3)原球茎增殖

茎尖和侧芽接种3 ~ 6个月后，根茎形成时可进行分裂和继代培养。白色或B11为增殖的基本培养基，液体培养基中添加1 ~ 2 mg/L萘乙酸为宜。放在慢速旋转床上光照培养(每分钟1 ~ 2转)，每15天更换一次培养基，连续继代培养3 ~ 4次，然后转移到相同成分的固体培养基上，添加活性炭(0 .3%)和柠檬酸(500mg/L)，每月继代培养一次。液体培养和固体培养交替进行。增殖时原球茎的分裂不能太小，培养组不能太小，培养液不能太多，继代培养时间不能太长。否则原球茎就长不好，甚至死亡。

(4)育苗和壮苗培育。

将原球茎转移到含B523mg/L 6苄基腺嘌呤0。2mg/L萘乙酸，在25左右，1 000 L光照下，芽和根能很快分化，形成完整的植株。

当幼苗长到2 ~ 3cm时，应及时转移到B52mg/L NAA 0 .3%活性炭培养基上，使根和芽按比例正常生长。一个大试管(30毫米 200毫米)是隋

由于兰科植物种子缺乏萌发所需的贮藏营养，人工播种需要无菌条件和合适的培养基才能萌发。中国兰花的发芽或发芽率极低，是因为种皮阻挡了水和气体的通过，含有阻碍发芽的物质，或者是因为胚活力弱。其中，陆生兰花的发芽率最低。因此，应采用无菌播种技术。

(1)种子消毒和预处理

取8 ~ 9年生的地兰花蒴果，用酒精棉擦去果面污垢，用消毒刀片将蒴果切开，取出种子，用细白布包裹。用无菌水浸泡使其膨胀，然后用无菌滤纸吸去多余水分，用0 .1 mol/L氢氧化钾溶液预处理5 ~ 10分钟(氢氧化钾溶液可软化种皮，去除抑制发芽的化学物质，显著提高紫茎泽兰的发芽率)，再用无菌水冲洗3次(操作中用玻璃棒挤压细白布袋，使其充分冲洗干净)。无菌滤纸吸水后，放入饱和漂白粉上清液中。氯化汞、次氯酸钠和漂白粉对种子表面消毒的效果优于双氧水。氯化汞对原球茎生长有不利影响，次氯酸钠和漂白粉能明显促进种子萌发和原球茎生长。

(2)播种培养基

常用的培养基有Knudson、Vacin Went、White、B11等。B11或白色1mg/l 6苄基腺嘌呤1mg/l萘乙酸0 .3%活性炭培养基是紫茎泽兰种子的最佳培养基。杂交种子为B11。

+ 1 毫克/ 升6 苄基腺嘌呤+ 1 毫克/ 升萘乙酸的培养基为佳。附加萘乙酸能提高兰花种子的萌发率, 但萌发后死亡数增加, 如与6 苄基腺嘌呤配合使用,效果较好。附加活性炭也能大大减少已萌发种子的死亡率, 尤其能提高地生兰种子的萌发率。但活性炭对地生兰×气生兰的杂交种子萌发却表现出明显的抑制作用。

　　(3 )原球茎培养

　　兰花种子无菌培养后经暗培养, 萌发形成白色原球茎, 再发育成绿色原球茎(气生兰呈圆球形, 地生兰呈根状)。放在25 ℃左右的有弱光的地方培养, 原球茎若转入White+ 2 毫克/ 升萘乙酸+ 5%椰乳+ 0 .2%活性炭的培养基中, 可大量增殖。

　　(4 )成苗与壮苗培养

　　根芽分化以B5+ 2 .5毫克/ 升6 苄基腺嘌呤+ 0 .2 毫克/ 升萘乙酸的培养基效果好。壮苗培养基以B5 最优。

　　(5 )试管苗的移栽和养护

　　兰花试管苗“ 自立”能力差, 移栽难度大。其移栽养护成功的关键技术是: 打开试管塞, 炼苗3～4天苗取出后洗净黏在根上的培养基, 并尽量少伤根。晾苗后栽植在通气、透水、保湿的介质中。先在高温弱光条件下缓苗6 ～10天, 然后在15～25 ℃ , 空气相对湿度80%左右的条件下养护, 并注意定期补施营养液。